液相色譜柱(zhu)的系(xi)統由儲液器、泵(beng)、進樣器、色譜柱(zhu)、檢(jian)測(ce)器、記(ji)錄儀等幾(ji)部(bu)分(fen)組成。儲液器中(zhong)的流(liu)動相被(bei)高壓泵(beng)打入(ru)系(xi)統，樣品溶液經進樣器進入流(liu)動相，被(bei)流(liu)動相載(zai)入色譜柱(zhu)(固定(ding)相(xiang))內(nei)，由於(yu)樣品溶液中(zhong)的各(ge)組分在(zai)兩(liang)相中(zhong)具(ju)有不同(tong)的分(fen)配系(xi)數(shu),在(zai)兩(liang)相中(zhong)作相對(dui)運(yun)動(dong)時，經過反(fan)復(fu)多次的吸(xi)附(fu)-解吸(xi)的分(fen)配過(guo)程，各(ge)組分在(zai)移動速(su)度(du)上產生(sheng)較大(da)的差(cha)別(bie)，被(bei)分(fen)離成單個(ge)組分依(yi)次從(cong)柱(zhu)內(nei)流(liu)出，通過檢測器(qi)時(shi)，樣品濃(nong)度(du)被(bei)轉(zhuan)換成電信號傳(chuan)送到記(ji)錄儀，數(shu)據(ju)以(yi)圖(tu)譜形式打印出來(lai)。 在(zai)色譜操(cao)作過程中(zhong)，需要(yao)註(zhu)意下列問題，以(yi)維護色譜柱(zhu)。
(1)柱(zhu)子在(zai)裝(zhuang)卸(xie)、更(geng)換時，動(dong)作要輕，接頭(tou)擰(ning)緊(jin)要適(shi)度(du)。必(bi)須防(fang)止較(jiao)強(qiang)的機(ji)械(xie)振動(dong)，以(yi)免柱(zhu)床產(chan)生空(kong)隙(xi)。
(2)如果儀(yi)器用(yong)來(lai)做(zuo)常規分(fen)析，樣品種(zhong)類有限(xian)，但(dan)分析次(ci)數(shu)多，則不妨為每壹類常規分(fen)析配置(zhi)壹根(gen)柱(zhu)，這(zhe)樣有助於(yu)延長柱(zhu)子的壽(shou)命。
(3)避免壓(ya)力(li)和(he)溫度(du)的急(ji)劇變(bian)化(hua)及任(ren)何(he)機械(xie)震動(dong)。
溫度(du)的突(tu)然(ran)變(bian)化或(huo)者使(shi)色譜柱(zhu)從(cong)高處掉(diao)下(xia)都(dou)會影(ying)響柱(zhu)內(nei)的填(tian)充(chong)狀況(kuang)；柱(zhu)壓(ya)的突(tu)然(ran)升(sheng)高或(huo)降低也(ye)會沖動柱(zhu)內(nei)填料，因(yin)此(ci)在(zai)調節流(liu)速(su)時(shi)應該緩慢進行，在(zai)閥進樣時閥的轉(zhuan)動(dong)不能(neng)過(guo)緩。
(4)應逐
漸(jian)改變(bian)溶劑的組成，特(te)別(bie)是(shi)反(fan)相色譜中(zhong)，不應直接從有機(ji)溶劑改變(bian)為全(quan)部是(shi)水，反(fan)之亦(yi)然(ran)。
(5)如使(shi)用柱(zhu)溫(wen)控(kong)制裝(zhuang)置(zhi)時，應註(zhu)意在(zai)通人流(liu)動相後才(cai)能(neng)升(sheng)溫。
(6)壹般說來(lai)液相色譜柱(zhu)不能(neng)反(fan)沖，只有生產(chan)者指(zhi)明(ming)該(gai)柱(zhu)可(ke)以(yi)反(fan)沖時，才可(ke)以(yi)反(fan)沖除去留(liu)在(zai)柱(zhu)頭(tou)的雜(za)質(zhi)。否(fou)則反(fan)沖會迅速(su)降低柱(zhu)效(xiao)。
(7)選(xuan)擇(ze)使(shi)用適(shi)宜(yi)的流(liu)動相，以(yi)避免固定(ding)相(xiang)被(bei)破(po)壞。有(you)時(shi)可(ke)以(yi)在(zai)進樣器前(qian)面連(lian)接(jie)壹個(ge)預(yu)柱(zhu)，分(fen)析(xi)柱(zhu)是(shi)鍵(jian)合矽膠(jiao)時(shi)，預(yu)柱(zhu)為矽膠(jiao)，可(ke)使(shi)流(liu)動相在(zai)進入分(fen)析(xi)柱(zhu)之前(qian)預(yu)先被(bei)矽膠(jiao)“飽(bao)和(he)”，避免分(fen)析(xi)柱(zhu)中(zhong)的矽膠(jiao)基(ji)質(zhi)被(bei)溶解(jie)。
(8)避免將基(ji)質(zhi)復(fu)雜的樣品尤(you)其(qi)是生物樣品直接註(zhu)人柱(zhu)內(nei)，需要(yao)對(dui)樣品進行預(yu)處理或(huo)者在(zai)進樣器和(he)色譜柱(zhu)之間連(lian)接(jie)壹個(ge)保(bao)護(hu)柱(zhu)。保(bao)護(hu)柱(zhu)壹般是填有(you)相(xiang)似固定(ding)相(xiang)的短(duan)柱(zhu)。保(bao)護(hu)柱(zhu)可(ke)以(yi)而(er)且(qie)應該經常更換。
(9)經常用強(qiang)溶劑沖洗(xi)色譜柱(zhu)，清(qing)除(chu)保留(liu)在(zai)柱(zhu)內(nei)的雜(za)質(zhi)。在(zai)進行清(qing)洗(xi)時，對(dui)流(liu)路系統中(zhong)流(liu)動相的置(zhi)換應以(yi)相(xiang)混溶的溶劑逐漸(jian)過渡(du)，每種(zhong)流(liu)動相的體積應是柱(zhu)體積的20倍左(zuo)右(you)，即常規分(fen)析需要(yao)50-75mL。
(10)保(bao)存色譜柱(zhu)時(shi)應將柱(zhu)內(nei)充(chong)滿乙(yi)腈或(huo)甲醇(chun)，柱(zhu)接(jie)頭(tou)要(yao)擰(ning)緊(jin)，防(fang)止溶劑揮發幹(gan)燥(zao)。禁止(zhi)將緩沖(chong)溶液留(liu)在(zai)柱(zhu)內(nei)靜置(zhi)過夜或(huo)更(geng)長時間。
(11)液相色譜柱(zhu)使(shi)用過(guo)程中(zhong)，如果壓(ya)力升(sheng)高，壹種(zhong)可(ke)能(neng)是(shi)燒結(jie)濾片被(bei)堵(du)塞，這時(shi)應更換濾片或(huo)將其取(qu)出進行清(qing)洗(xi)；另壹種(zhong)可(ke)能(neng)是(shi)大分(fen)子進人柱(zhu)內(nei)，使(shi)柱(zhu)頭(tou)被(bei)汙(wu)染；如果柱(zhu)效(xiao)降低或(huo)色譜峰變(bian)形，則可(ke)能(neng)柱(zhu)頭(tou)出(chu)現塌陷(xian)，死體積增大(da)。
(12)在(zai)完(wan)成分離(li)分析工(gong)作之後，不應立即停(ting)機，需及(ji)時(shi)對(dui)色譜分析(xi)系統進行沖(chong)洗(xi)，壹般0.5h以(yi)上，以(yi)除(chu)去色譜柱(zhu)內(nei)的雜(za)質(zhi)。
