高(gao)效液(ye)相(xiang)色譜是(shi)目前應用(yong)最多的(de)色譜分(fen)析(xi)方(fang)法，高(gao)效液(ye)相(xiang)色譜系(xi)統由流動(dong)相儲(chu)液(ye)體(ti)瓶、輸(shu)液(ye)泵(beng)、進(jin)樣(yang)器、色譜柱(zhu)、檢(jian)測(ce)器和記(ji)錄器組成，其(qi)整體(ti)組成類(lei)似於氣(qi)相(xiang)色譜，但(dan)是(shi)針對其(qi)流動(dong)相為液(ye)體(ti)的(de)特點作(zuo)出很(hen)多調(tiao)整。HPLC的(de)輸(shu)液(ye)泵(beng)要(yao)求(qiu)輸(shu)液(ye)量(liang)恒定(ding)平穩(wen);進(jin)樣(yang)系統(tong)要(yao)求(qiu)進(jin)樣(yang)便利(li)切換嚴密;由於液(ye)體(ti)流動(dong)相粘(zhan)度遠(yuan)遠(yuan)高(gao)於(yu)氣(qi)體(ti)，為了(le)減(jian)低柱(zhu)壓(ya)高(gao)效液(ye)相(xiang)色譜的(de)色譜柱(zhu)壹(yi)般比較(jiao)粗(cu)，長度也遠(yuan)小(xiao)於(yu)氣相色譜柱(zhu)。HPLC應用(yong)非(fei)常(chang)廣泛(fan)，幾乎遍(bian)及(ji)定(ding)量定性(xing)分(fen)析(xi)的(de)各(ge)個領域。
高(gao)效液(ye)相(xiang)色譜儀(yi)的系(xi)統(tong)由儲(chu)液(ye)器、泵、進(jin)樣(yang)器、色譜柱(zhu)、檢(jian)測(ce)器、記(ji)錄儀(yi)等幾部(bu)分(fen)組成。儲(chu)液(ye)器中的流動(dong)相被(bei)高(gao)壓(ya)泵(beng)打(da)入(ru)系(xi)統(tong)，樣(yang)品溶液(ye)經(jing)進(jin)樣(yang)器進(jin)入(ru)流動(dong)相，被(bei)流動(dong)相載(zai)入(ru)色譜柱(zhu)(固定(ding)相(xiang))內(nei)，由於樣(yang)品溶液(ye)中(zhong)的(de)各(ge)組分(fen)在(zai)兩相中具有(you)不(bu)同的分(fen)配(pei)系數，在兩(liang)相(xiang)中(zhong)做相(xiang)對運(yun)動時(shi)，經過反復(fu)多次(ci)的(de)吸(xi)附(fu)-解(jie)吸(xi)的分(fen)配(pei)過程，各組分(fen)在(zai)移動速(su)度上產生較大的差別(bie)，被(bei)分(fen)離成(cheng)單個組分(fen)依(yi)次從柱內(nei)流出，通過檢(jian)測(ce)器時，樣(yang)品濃(nong)度被(bei)轉(zhuan)換成電(dian)信(xin)號傳(chuan)送到記(ji)錄儀(yi)，數(shu)據以(yi)圖譜形(xing)式打印(yin)出來(lai)。
1、樣(yang)品準(zhun)備(bei)：樣(yang)品準(zhun)備(bei)對(dui)HPLC分(fen)析(xi)結果至(zhi)關重(zhong)要。確(que)保(bao)樣(yang)品純凈(jing)，並(bing)根據所(suo)需(xu)分(fen)離目標選擇(ze)適當的提(ti)取(qu)、凈(jing)化和濃(nong)縮(suo)方法。
2、色譜柱(zhu)選擇(ze)：根據需(xu)要(yao)分(fen)離的(de)化(hua)合物特性(xing)選擇(ze)合適的(de)色譜柱(zhu)。考慮分(fen)離機(ji)理、柱(zhu)填(tian)料(liao)類(lei)型(xing)、柱(zhu)尺(chi)寸(cun)和固定(ding)相(xiang)親(qin)水(shui)/疏(shu)水(shui)性(xing)等因(yin)素。
3、流動(dong)相選擇(ze)：根據待分(fen)離物(wu)的(de)極(ji)性(xing)選擇(ze)合適的(de)流動(dong)相組合。優(you)化(hua)溶劑體(ti)系(xi)，平(ping)衡(heng)分(fen)辨率(lv)和保留(liu)時(shi)間。
4、校(xiao)準(zhun)曲(qu)線：為了(le)定量(liang)分(fen)析(xi)，建(jian)立(li)準(zhun)確(que)的(de)校(xiao)準(zhun)曲(qu)線並(bing)進(jin)行(xing)適當的驗(yan)證(zheng)。使用(yong)已(yi)知濃(nong)度的標(biao)準(zhun)品(pin)制備(bei)壹(yi)系列濃(nong)度點，並(bing)確定(ding)響應(ying)因(yin)子(zi)或檢(jian)測(ce)靈(ling)敏度。
5、進(jin)樣(yang)方法：選擇(ze)適當的進(jin)樣(yang)方法，如自動(dong)進(jin)樣(yang)器或手動(dong)進(jin)樣(yang)。確保(bao)進(jin)樣(yang)量恒定(ding)且(qie)符合儀器要求(qiu)。
6、溫(wen)度控制：壹(yi)些分(fen)析(xi)可(ke)能需(xu)要(yao)在特定(ding)溫度下(xia)進(jin)行(xing)。使用(yong)恒溫(wen)箱(xiang)或(huo)列溫控(kong)制器確保色譜柱(zhu)處於(yu)穩(wen)定(ding)的溫度條件(jian)下(xia)。
7、檢(jian)測(ce)器設置(zhi)：根(gen)據目標化(hua)合物的(de)特性(xing)選擇(ze)合適的(de)檢(jian)測(ce)器。常見的檢(jian)測(ce)器包(bao)括(kuo)紫(zi)外-可(ke)見光(guang)譜檢(jian)測(ce)器（UV-Vis）、熒(ying)光(guang)檢(jian)測(ce)器、電(dian)化(hua)學(xue)檢(jian)測(ce)器等。
8、數(shu)據分(fen)析(xi)：正(zheng)確(que)解釋(shi)和分(fen)析(xi)HPLC數(shu)據是確(que)保準(zhun)確(que)結果的關鍵(jian)。使用(yong)合適的(de)軟件進(jin)行(xing)峰識(shi)別(bie)、積分(fen)和定量(liang)計(ji)算。
9、儀器維(wei)護：定(ding)期(qi)進(jin)行(xing)儀器維(wei)護和校(xiao)準(zhun)，包(bao)括(kuo)清(qing)洗(xi)色譜柱(zhu)、更換流動(dong)相溶劑和檢(jian)查(zha)液(ye)壓(ya)系(xi)統(tong)等。
