高(gao)效液相色譜(pu)儀(yi)是(shi)壹(yi)種基(ji)於色譜(pu)技(ji)術(shu)的(de)分析(xi)儀(yi)器,具有高(gao)分(fen)離(li)能(neng)力(li)、高(gao)靈敏(min)度和(he)廣(guang)泛(fan)的(de)應用(yong)範(fan)圍(wei)。它(ta)在(zai)化學(xue)、生物(wu)、制(zhi)藥、環境和食品等領(ling)域中扮演著(zhe)重(zhong)要(yao)的(de)角(jiao)色。基(ji)於液(ye)相色譜(pu)技(ji)術(shu),通過(guo)樣(yang)品(pin)在(zai)固(gu)定相上的(de)分配(pei)和(he)吸(xi)附作(zuo)用(yong)來實現(xian)分離(li)。它(ta)利(li)用高(gao)壓(ya)泵(beng)將(jiang)流動相(溶劑(ji))推(tui)動通(tong)過(guo)色譜(pu)柱,樣(yang)品(pin)溶液(ye)通(tong)過(guo)柱時,不(bu)同成分(fen)因(yin)為(wei)在固定相上的(de)相互(hu)作用(yong)力不(bu)同而(er)分(fen)離(li)出來。通過(guo)調整流(liu)動相的(de)性質和梯(ti)度(du)條(tiao)件(jian),可(ke)以實現(xian)對復雜(za)樣(yang)品(pin)的(de)高(gao)效分離(li)。
1、高(gao)壓(ya)輸液系(xi)統:
HPLC采(cai)用高(gao)壓(ya)泵(beng)來推(tui)動流(liu)動相通過(guo)色譜(pu)柱,以實現(xian)快速、高(gao)效的(de)分離(li)。高(gao)壓(ya)泵(beng)的(de)輸出壓(ya)力通(tong)常(chang)在(zai)4.7×10^7Pa至(zhi)4.4×10^7Pa之間(jian),流(liu)速可調(tiao)且(qie)穩定。這(zhe)種(zhong)高(gao)壓(ya)輸液方(fang)式能(neng)夠(gou)降(jiang)低樣(yang)品(pin)在(zai)色譜(pu)柱中的(de)擴散(san)效應,加(jia)快(kuai)其在(zai)柱中的(de)移(yi)動速度,從(cong)而(er)提(ti)高(gao)分(fen)辨率和(he)回(hui)收(shou)率。
2、進(jin)樣(yang)系(xi)統(tong):
進(jin)樣(yang)系(xi)統(tong)壹(yi)般(ban)采(cai)用隔(ge)膜(mo)註射(she)進樣(yang)器(qi)或(huo)高(gao)壓(ya)進樣(yang)間(jian)完(wan)成進(jin)樣(yang)操作(zuo),進(jin)樣(yang)量恒(heng)定,有助(zhu)於提(ti)高(gao)分(fen)析(xi)樣(yang)品(pin)的(de)重(zhong)復(fu)性。進樣(yang)器(qi)應(ying)具有微(wei)量進樣(yang)功(gong)能(neng),且(qie)進(jin)樣(yang)操作(zuo)簡(jian)便、快(kuai)速。常(chang)見(jian)的(de)進樣(yang)方(fang)式包(bao)括閥(fa)進(jin)樣(yang)和(he)自(zi)動進(jin)樣(yang)器(qi)裝(zhuang)樣(yang)。
3、色譜(pu)柱:
色譜(pu)柱是(shi)HPLC的(de)核心(xin)部(bu)件(jian),用(yong)於分(fen)離(li)樣(yang)品(pin)中的(de)各組分(fen)。色譜(pu)柱內(nei)部(bu)填充(chong)有固(gu)定相,不(bu)同組分(fen)在固定相和流(liu)動相之間(jian)的(de)分配(pei)系(xi)數(shu)不(bu)同,從(cong)而(er)實(shi)現(xian)分離(li)。色譜(pu)柱的(de)長度壹(yi)般(ban)為10~50cm,內(nei)徑(jing)為2~5mm,由優(you)質不(bu)銹(xiu)鋼或厚壁玻(bo)璃管(guan)等材(cai)料(liao)制(zhi)成。固(gu)定相的(de)粒度(du)通(tong)常(chang)為(wei)5~10μm,具有高(gao)柱效但會引(yin)起(qi)高(gao)阻(zu)力(li)。
4、檢測(ce)系統:
檢測(ce)器將(jiang)色譜(pu)柱連(lian)續(xu)流出的(de)樣(yang)品(pin)組分(fen)轉變成易(yi)於測(ce)量的(de)電信(xin)號(hao),被數據(ju)系統(tong)接收並(bing)得(de)到(dao)樣(yang)品(pin)分(fen)離(li)的(de)色譜(pu)圖(tu)。常(chang)見(jian)的(de)檢測(ce)器有紫外(wai)-可(ke)見(jian)光(guang)檢測(ce)器、熒(ying)光檢(jian)測(ce)器、電導檢(jian)測(ce)器等,可(ke)根(gen)據不(bu)同物(wu)質的(de)吸收(shou)、發(fa)射(she)或電導特(te)性(xing)進行檢測(ce)。
5、數據處理(li)系(xi)統(tong):
數據處(chu)理(li)系(xi)統(tong)用於處(chu)理(li)記(ji)錄儀(yi)記錄的(de)信號(hao),進(jin)行(xing)色譜(pu)峰(feng)識別、定量和定性(xing)分(fen)析(xi)等。該系(xi)統(tong)應(ying)具有強大(da)的(de)數據(ju)處(chu)理(li)能(neng)力(li)和友好(hao)的(de)用戶(hu)界面。
6、其他(ta)輔助(zhu)系統:
包(bao)括流動相儲存(cun)器、脫(tuo)氣器(qi)、梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)裝(zhuang)置(zhi)等。流(liu)動相儲存(cun)器用(yong)於儲(chu)存(cun)流動相,通常(chang)為(wei)高(gao)壓(ya)密封(feng)容器(qi),可(ke)確(que)保流(liu)動相的(de)純(chun)度和(he)穩定性(xing)。脫(tuo)氣器(qi)用於防(fang)止(zhi)流(liu)動相從(cong)色譜(pu)柱內(nei)流出時釋(shi)放出氣泡進入檢測(ce)器,從(cong)而(er)引(yin)起(qi)噪(zao)聲。梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)裝(zhuang)置(zhi)可(ke)在(zai)分(fen)離(li)過(guo)程中通過(guo)逐(zhu)漸改變流動相的(de)組成增加(jia)洗(xi)脫(tuo)能力(li)。